第八百七十五章 蒲地蓝消炎口服液（1）

    钟医当然不会让这种气彻底的下去。
   他开口说话。
   “我当然知道大家的震惊，也知道大家的担心和忧虑。所以……我们那实验来说话吧。”钟医说道。
   “实验过程。”杨光迫不及待地说道。
   钟医当然不会让杨光久等。
   “蒲地蓝消炎口服液是由蒲公英、板蓝根、苦地丁、黄芩组成，具有清热解毒、消肿利咽的功效，适用于疖肿、腮腺炎、咽炎、扁桃体炎。
   我们在临床上常用于治疗急性上呼吸道感染，效果良好。
   当然，大家都没有什么实际例子。
   现在，我们有显示蒲地蓝消炎口服液对脂多糖诱导的大鼠急性肺炎具有保护作用，可减轻大鼠急性肺炎模型中肺组织的炎症反应，对肺组织的病理损伤有修复作用。
   我们研究发现，肺部感染性疾病诱发的炎症，与三羧酸循环等能量代谢过程紧密相关。
   代谢组学是对生物体内代谢物进行定量分析，并寻找代谢物与生理病理变化相对关系的研究方式。
   靶向代谢组学通过对生物样品中目标的低丰度代谢产物进行定量，能够更准确地反映生物系统中代谢分子的浓度变化，是代谢组学当前研究的新热点。
   蒲地蓝消炎口服液在临床广泛运用于呼吸系统疾病的防治，疗效显着，基础研究结果显示，蒲地蓝消炎口服液能够显着改善脂多糖诱导小鼠急性肺炎，但尚未有对能量代谢方面的研究。
   所以，我们做了整个研究，本研究以脂多糖诱导ICR小鼠急性肺炎模型为研究对象，以靶向代谢组学为技术手段。
   用这个研究来探讨蒲地蓝消炎口服液对脂多糖诱导的急性肺炎小鼠糖酵解和三羧酸循环等机体能量代谢的影响及其可能的作用机制。
   为后续开展蒲地蓝消炎口服液抗急性肺炎的作用机制研究与临床用药提供方向和依据。”
   见众人竖起耳朵在听，钟医就没有卖关子了。
   他说道：“首先，我们用到的仪器有：小时YQ-3110微量振荡器涡旋混匀器，低速台式离心机TDL-80-2B。
   电热恒温水浴锅，超纯水系统，NewClassicMS型分析天平(d=0.01毫克)，Kh-500B型超声清洗器，来自昆山市超声仪器有限公司。
   TSQ8000型三重四级杆气相色谱质谱联用仪，色谱柱多功能酶标仪。
   所用的药物有，我们自己生产的蒲地蓝消炎口服液，。
   拜阿司匹林。乙醚。甲醇。1，2-13C2-肉豆蔻酸、吡啶、N，O-双(三甲基硅基)三氟乙酰胺(BSTFA)、甲氧基胺盐酸盐。正己烷。
   氯化钠。标准品:丙酮酸、乳酸、葡萄糖、3-磷酸甘油酸、琥珀酸苹果酸、富马酸、柠檬酸和α-酮戊二酸。”
   “方法那就更加简单了。”
   “首先，动物实验及样本收集36只ICR小鼠，体质量(20±5)g，雌雄各半，按体质量随机分为6组，每组6只。
   也就是对照组、模型组、拜阿司匹林组(200毫克千克)、蒲地蓝消炎口服液低剂量组(1.3毫升千克)、蒲地蓝消炎口服液中剂量组(3.9毫升千克)、蒲地蓝消炎口服液高剂量组(11.7毫升千克)。
   拜阿司匹林组和蒲地蓝消炎口服液各剂量组给予相应剂量药物，每日1次，连续5d，空白组和模型组灌胃等体积的生理盐水。
   末次给药1小时后，除空白组外，其余各组构建急性肺炎模型。
   即使用异氟烷麻醉小鼠后，用脂多糖(2毫克千克)给小鼠滴鼻造模，空白组滴入相同体积生理盐水，造模12小时后进行取材。
   各组小鼠摘眼球取血，解剖并取左肺中叶用百分之10甲醛溶液固定，石蜡包埋后进行小时E染色，分装部分血清用于检测IL-10、TNF-α和NF-κB的含量，剩余血清置于-80摄氏度保存，进行后续代谢组学检测。”
   钟医喘了一口气，继续说道。
   “其次，是溶液的配制。
   精密称取丙酮酸、乳酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、α-酮戊二酸、磷酸烯醇式丙酮酸、顺式乌头酸、3-磷酸甘油酸、柠檬酸、异柠檬酸和葡萄糖对照品，溶解成1毫克毫升的对照品储备液。
   精密量取上述对照品储备液分别稀释成4、120、16、0.1、0.5、1、0.02、0.01、0.04、2.5、0.16、240微克毫升的对照品溶液，4摄氏度保存。
   精密称取1，肉豆蔻酸适量置于10毫升容量瓶中，加甲醇稀释溶解，配制成1毫克毫升的内标储备液，4摄氏度保存。
   吸取内标储备液适量，加入甲醇稀释成浓度为5微克毫升的内标工作液。
   然后是样本前处理及衍生化反应。
   取50微升血清，加入200微升预冷的含1，2-13C2-肉豆蔻酸(5微克毫升)的甲醇溶液，涡旋3分钟，4摄氏度离心10分钟(r分钟)。
   同时，取上清液100微升置30摄氏度真空浓缩仪挥干2小时，加10毫克毫升甲氧胺吡啶30微升，涡旋5分钟，30摄氏度振荡1.5小时。
   继续加入30微升BSTFA，涡旋5分钟，37摄氏度振荡半小时，最后将样品4摄氏度离心10分钟，r分钟，取上清进样。
   最后，分析条件色谱条件:载气为氦气，流速1.2毫升分钟，采用分流进样，分流流速为24.0毫升分钟，分流比为20∶1。
   色谱柱:TG-5MS30m×0.25mm×0.25μm，进样口温度300摄氏度。
   升温程序:60摄氏度保持1分钟，以20摄氏度分钟升至320摄氏度，保持5分钟。
   质谱条件:EI电离源，电子能量为70eV，离子源温度为300摄氏度，传输线温度为300摄氏度。溶剂峰延迟时间为3.8分钟。
   采用全扫描模式，扫描范围mz50~500。
   各代谢物靶向定量测定采用选择反应监测(SRM)模式，碰撞气为高纯氩气(99.999%)。
   质谱参数优化吸取一定量的各代谢物的储备液和内标储备液进行混合，用甲醇稀释并挥干，采用衍生化条件进行衍生化并进样，采用全扫模式，对代谢物进行测定，确定各代谢物及内标的出峰时间。
   然后，我们再采用TSQ8000的AutoSRM分析模式自动优化质谱仪分析参数，优化后的各物质参数是……”
   “是什么？”杨光好奇又迫切地问道。
  


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